【摘要】  目的 建立同时测定辣椒精中2个主要成分辣椒碱及二氢辣椒碱含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱方法,C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),甲醇-水(70∶30)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为280 nm。结果 辣椒碱及二氢辣椒碱分别在1.955～7.820 μg(r＝0.999 9)、2.709～7.224 μg(r＝0.995 5)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率分别为101.57%、108.87%。结论 该法简便,结果准确、可靠,可用于测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量。

【关键词】  辣椒精；辣椒碱；二氢辣椒碱；高效液相色谱法；含量测定

　　Abstract：Objective To establish an HPLC method to determine the two principal constituent - capsaicin and dihydrocapsaicin in general alkaloids of Capsaicin. Method The analysis was performed on C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm), with methanol-water (70∶30) as the mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was set at 280 nm. Result The linear relationships of capsaicin and dihydrocapsaicin were within the range of 1.955～7.820 μg (r＝0.999 9) and 2.709～7.224 μg (r＝0.995 5), respectively. The average recoveries were 101.57% and 108.87%, respectively. Conclusion The method is convenient, the result is accurate and reliable, and can be used to determine the content of two principal constituent in general alkaloids of Capsaicin.

　　Key words：general alkaloids of Capsaicin；capsaicin；dihydrocapsaicin；HPLC；content determination

　　辣椒精为植物辣椒中经物理方法提练、精制而成,常用作镇痛、消炎、活血、冻伤、止痒、杀菌、戒毒、祛风湿、止痛、减肥。辣椒中的主要化学成分为辣椒碱和二氢辣椒碱,不同辣椒品种果实整体及不同部位中辣椒总碱的含量不同。为了建立辣椒有效成分质量控制标准,达到有效控制辣椒精质量的目的,本试验建立了高效液相色谱(HLPC)法测定辣椒精中主要成分辣椒碱及二氢辣椒碱的定量分析方法。该方法简便快速,分离度好,准确度高,可为辣椒精质量控制提供参考。

　　1  仪器与试药

　　LC-10AT vp plus高效液相色谱仪(日本岛津),SPD-10A vp plus检测器；AB265-s电子分析天平(METTLER瑞士)；超声仪。

　　辣椒碱、二氢辣椒碱对照品由美国Sigma公司提供；辣椒精油溶液样品(河南倍特生物科技有限公司,批号20090416)。甲醇为色谱纯,水为双蒸水(自制)。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

　　色谱柱为C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相为甲醇-水(70∶30)；流速为1.0 mL/min；柱温为25 ℃；检测波长为280 nm；进样量20 μL。在此条件下辣椒碱的保留时间为12.20 min,二氢辣椒碱的保留时间为16.52 min,能与其他成分很好分开。色谱图见图1。

　　注：1.辣椒碱；2.二氢辣椒碱；A.辣椒碱对照品；B.二氢辣椒碱对照品；C.供试品 图1辣椒精HPLC图谱

　　2.2  对照品溶液的制备

　　分别精密称取辣椒碱和二氢辣椒碱粉末适量,分别置于10 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成约含0.200 0 g/L的辣椒碱和二氢辣椒碱的对照品溶液,低温避光保存备用。

　　2.3  供试品溶液的制备

　　精密称取辣椒精油样品0.03 g,置100 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,以0.45 μm微孔滤膜滤过,即得。2.4  线性关系考察

　　分别精密吸取辣椒碱和二氢辣椒碱对照品溶液,分别进样10、15、20、25、30、35、40 μL,按上述色谱条件分析测定。以峰面积(A)为纵坐标,进样量(mg)为横坐标绘制工作曲线,得辣椒碱和二氢辣椒碱回归方程,分别为：Y＝5.54×106X－3.7×104(r＝0.999 9)；Y＝2.29×106X－3.3×105(r＝0.995 5),线性范围分别为1.955～7.820 μg和2.709～7.224 μg。

　　2.5  精密度试验

　　分别吸取辣椒碱和二氢辣椒碱同一对照品溶液,重复进样6次,20 μL/次,测定其峰面积,计算其RSD分别为0.24%和0.92%,表明仪器精密度良好。

　　2.6  稳定性试验

　　精密吸取同一样品溶液20 μL,分别于0、4、12、24、36、48 h进样分析,分别测定峰面积,计算其RSD,结果辣椒碱峰为0.92%,二氢辣椒碱峰为2.35%,表明样品溶液在48 h内稳定性良好。

　　2.7  重复性试验

　　精密称取6份辣椒精油样品0.03 g,按“2.3”项下方法制得供试品溶液,分别进样20 μL,分别计算样品中辣椒碱和二氢辣椒碱含量,结果其RSD分别为0.69%和0.72%。

　　2.8  加样回收率试验

　　精密称取10份已测知辣椒碱和二氢辣椒碱含量的辣椒精样品0.03 g,分为2组,分别准确加入辣椒碱0.02 mg和已知浓度的二氢辣椒碱对照品溶液,依法测定,并计算加样回收率,结果见表1、表2。表1辣椒碱加样回收率试验结果 表2二氢辣椒碱加样回收率试验结果

　　2.9  样品测定

　　取辣椒精油样品约0.03 g,精密称定,以甲醇溶解,经0.45 μm微孔滤膜过滤后,超声脱气30 min,按上述色谱条件进行分析测定。以20 μL进样测定色谱峰面积,根据标准曲线计算样品中辣椒碱和二氢辣椒碱的质量分数。结果辣椒碱平均质量分数为51.59%,RSD＝0.69%,二氢辣椒碱的平均质量分数为49.72%,RSD＝0.72%。

　　3  讨论

　　本试验为了能在适宜的分析时间内获得指标成分的完全分离,对流动相体系进行了反复摸索,随着流动相甲醇-水的比例变化(75∶25、70∶30、65∶35、60∶40),出峰时间逐渐延长,峰高逐渐变小,峰面积也逐渐变小,分离度差。故最终确定用70∶30比例洗脱。

　　试验中还对辣椒精水样、天然辣椒碱进行了含量测定。结果方法稳定可靠,重复性好,适合于辣椒总碱的质量控制